Note: Proteomic and Glycosylation Analysis of Biotherapeutic Proteins (hosted by -BRIC)

Note: Proteomic and Glycosylation Analysis of Biotherapeutic Proteins

Webinar hosted by : Bioprocess Research and Innovation Centre (BRIC)

Application of mass spectrometry to Biopharma

https://www.ema.europa.eu/en

https://www.ema.europa.eu/en/human-regulatory/research-development/scientific-guidelines/biologicals/biologicals-active-substance#manufacture,-characterisation-and-control-of-the-active-substance-section

ตัวอย่างที่เขายกมาคือ monoclonal antibody ก็คือ ต้องโชว์ว่าโคลนตัวนี้สามารถที่จะผลิต protein ที่เหมือนกับ genetic materials หรือเปล่า และแต่ละลอตมีปัญหาหรือเปล่า สิ่งที่เราอ่านก็คือ peptide map แล้วเอามาเทียบกันในแต่ละลอต

IgG – glycosylated protein – glycan on the protein must be characterized, depending on the cell types you are using – glycosylation pattern is very different in each cell type.

Heterogeneity มี micro and macro

• Micro ต่างกันที่ side chain นิดเดียว
• Macro ต่างกันที่ pattern ที่ไป glycosylate เลย

ขึ้นอยู่กับว่าเราจะดีเทคแบบไหน วิธีดีเทคแต่ละแบบก็จะ consume เวลา และงบประมาณแตกต่างกัน ดังนั้นมันขึ้นอยุ่กับว่า product ที่เราผลิตออกมานั้นอะไรส่งผลต่อฤทธิ์ทางชีวภาพ

Amino acid สามารถที่จะถูก chemical reaction ทำให้เปลี่ยนแปลงรูปแบบไปได้ ซึ่งเวลาเราได้ผลจาก mass spec

ถามคำถามเรื่อง glycosylation ไป ว่ามีผลอะไรต่อ protein folding ไหม และต้องทดสอบโครงสร้าง 3 มิติด้วยหรือเปล่า หรือแม้กระทั่ง cell-based assay (หรือทดสอบหน้าที่การทำงานของโปรตีนตัวนั้น)

Glycosylation มีผลต่อ physico-chemical properties ในหลาย ๆ เรื่อง เช่น มีผลต่อ stability solubility หรือแม้กระทั่ง protein folding เอาจริง ๆ ก็ไม่จำเป็นถึงขนาดต้องทำ 3D-structural determination แต่ถ้าทำ proteomics แล่ว pattern มันเปลี่ยนไปในลอตนั้น มันก็อาจจะส่งผลต่อ property ของตัว glycosylated product ได้ – แต่ถ้าทำ functional study แล้วให้ผลไม่ต่างกัน ก็แสดงว่า modification ดังกล่าว ไม่มีผลมากนักในเชิง biology